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無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)指南（無(wú)菌原料藥）
1. 目的
為指導(dǎo)和規(guī)范無(wú)菌原料藥生產(chǎn)企業(yè)開(kāi)展無(wú)菌工藝模擬驗(yàn)證，充分評(píng)價(jià)無(wú)菌原料藥生產(chǎn)過(guò)程的無(wú)菌保障水平，確保無(wú)菌原料藥的安全性，依據(jù)《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）》及附錄，制定本指南。
2. 定義
本指南所述的無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)，是指采用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基或其他介質(zhì)，模擬原料藥生產(chǎn)中無(wú)菌操作的全過(guò)程，評(píng)價(jià)該工藝無(wú)菌保障水平的一系列活動(dòng)。
3. 范圍
3.1 本指南涵蓋了無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)的基本要求、不同工藝模式的相應(yīng)要求、試驗(yàn)的基本流程和結(jié)果評(píng)價(jià)等內(nèi)容，適用于無(wú)菌原料藥的無(wú)菌工藝驗(yàn)證。
3.2 本指南所述條款是在現(xiàn)有無(wú)菌工藝技術(shù)基礎(chǔ)上提出的相關(guān)要求，旨在規(guī)范企業(yè)開(kāi)展無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)活動(dòng)。在科學(xué)的基礎(chǔ)上，鼓勵(lì)新技術(shù)、新設(shè)備的引入，進(jìn)一步提高無(wú)菌原料藥的無(wú)菌保障水平。
4. 原則
在對(duì)無(wú)菌生產(chǎn)工藝充分認(rèn)知和生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)累積的基礎(chǔ)上，應(yīng)結(jié)合工藝、設(shè)備、人員和環(huán)境等要素定期開(kāi)展無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)，以確認(rèn)無(wú)菌生產(chǎn)過(guò)程的可靠性。同時(shí)也為企業(yè)及時(shí)識(shí)別風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)而改進(jìn)無(wú)菌控制措施提供數(shù)據(jù)支持。開(kāi)展無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)應(yīng)遵循以下原則：
4.1 基于無(wú)菌工藝設(shè)計(jì)，對(duì)無(wú)菌生產(chǎn)全過(guò)程實(shí)施風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，識(shí)別生產(chǎn)過(guò)程風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，評(píng)估現(xiàn)有控制措施的有效性。模擬試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)時(shí)，應(yīng)充分考慮風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的結(jié)果。
4.2 應(yīng)充分考慮硬件裝備水平與無(wú)菌風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)性，結(jié)合無(wú)菌生產(chǎn)過(guò)程所涉及到的工藝、設(shè)備、人員以及操作時(shí)限等因素針對(duì)性開(kāi)展模擬試驗(yàn)，盡可能模擬實(shí)際無(wú)菌生產(chǎn)全過(guò)程，應(yīng)特別關(guān)注暴露操作、人工干預(yù)等高風(fēng)險(xiǎn)過(guò)程。
4.3 如生產(chǎn)線有多種無(wú)菌生產(chǎn)工藝，應(yīng)采用風(fēng)險(xiǎn)管理的模式，在綜合評(píng)價(jià)不同無(wú)菌生產(chǎn)工藝的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)模擬試驗(yàn)方案，以評(píng)價(jià)每種無(wú)菌工藝過(guò)程的可靠性。
4.4 如無(wú)菌生產(chǎn)工藝存在顯著差異，宜對(duì)每種工藝開(kāi)展模擬試驗(yàn)。
5. 無(wú)菌原料藥生產(chǎn)工藝及模擬范圍
無(wú)菌原料藥的無(wú)菌生產(chǎn)工藝通常為：原料藥進(jìn)一步精制和無(wú)菌操作的結(jié)合，作為無(wú)菌原料藥生產(chǎn)工藝的開(kāi)始，多采用除菌過(guò)濾或其他除菌技術(shù)將物料中的微生物去除，之后采取無(wú)菌操作技術(shù)的工藝單元，最終獲得免受微生物污染的原料藥。無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)應(yīng)從第一步無(wú)菌操作開(kāi)始，即經(jīng)除菌過(guò)濾或其他方法獲取無(wú)菌藥液，直至無(wú)菌產(chǎn)品完全密封結(jié)束。
與無(wú)菌制劑工藝相比，無(wú)菌原料藥的生產(chǎn)工藝一般更復(fù)雜，工藝設(shè)備選型呈現(xiàn)出非標(biāo)化和功能設(shè)計(jì)差異化等特點(diǎn)。即使是同一無(wú)菌工藝過(guò)程，因設(shè)備選型和系統(tǒng)密閉程度的不同，無(wú)菌風(fēng)險(xiǎn)也存在著顯著差異。
目前，無(wú)菌原料藥常用無(wú)菌工藝包括：無(wú)菌結(jié)晶工藝、無(wú)菌冷凍工藝和無(wú)菌噴霧干燥工藝。
5.1 無(wú)菌結(jié)晶工藝
典型的無(wú)菌結(jié)晶工藝流程是從非無(wú)菌物料開(kāi)始，經(jīng)除菌過(guò)濾進(jìn)入無(wú)菌結(jié)晶罐內(nèi)，通過(guò)調(diào)整物料溫度或加入其他溶劑使物料中有效活性成分結(jié)晶或沉淀析出，該過(guò)程會(huì)因控制晶體生長(zhǎng)的需要而引入晶種。養(yǎng)晶結(jié)束后進(jìn)入固液分離設(shè)備，去除母液獲得濕品，必要時(shí)對(duì)濕品進(jìn)行洗滌，濕品在固液分離設(shè)備內(nèi)進(jìn)行干燥或通過(guò)輔助密閉系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至其他干燥設(shè)備內(nèi)進(jìn)行干燥，之后根據(jù)產(chǎn)品特性和最終質(zhì)量要求進(jìn)行必要的整粒（或微粉化），以控制產(chǎn)品粒度大小和分布，混粉也是常用的工藝單元，主要解決產(chǎn)品均一性的問(wèn)題。最后產(chǎn)品經(jīng)分裝、密封，將產(chǎn)品嚴(yán)封于容器內(nèi)。
5.2 無(wú)菌凍干工藝
常見(jiàn)的無(wú)菌凍干工藝流程包括：液體物料經(jīng)除菌過(guò)濾得到無(wú)菌料液，在無(wú)菌防護(hù)下使用加料槍將無(wú)菌料液注入凍干機(jī)托盤(pán)內(nèi)，按照規(guī)定程序進(jìn)行冷凍真空干燥，干燥結(jié)束后經(jīng)除菌級(jí)呼吸器釋放凍干機(jī)內(nèi)的真空。在無(wú)菌防護(hù)下打開(kāi)凍干機(jī)門(mén)，將干品由托盤(pán)轉(zhuǎn)移至無(wú)菌料倉(cāng)內(nèi)，或在無(wú)菌防護(hù)下通過(guò)真空密閉吸料系統(tǒng)將干品轉(zhuǎn)移至下一工序，干品通常需要整粒和混粉工藝，以得到質(zhì)量均一的干品，最后經(jīng)分裝、密封，將產(chǎn)品嚴(yán)封于容器內(nèi)。
5.3 無(wú)菌噴霧干燥工藝
無(wú)菌噴干工藝適用于耐熱性好的無(wú)菌原料藥，工藝流程通常包括：液體物料經(jīng)除菌過(guò)濾后持續(xù)穩(wěn)定地注入干燥塔內(nèi)，在無(wú)菌高壓空氣的作用下瞬間霧化成液滴，并與流動(dòng)的無(wú)菌熱空氣發(fā)生傳質(zhì)傳熱，液滴因水分迅速蒸發(fā)而變?yōu)榉勰罡善?，獲得的干品經(jīng)氣固分離器收集至無(wú)菌料倉(cāng)內(nèi)，或直接分裝至最終市售包裝內(nèi)。產(chǎn)品在料倉(cāng)內(nèi)可實(shí)現(xiàn)進(jìn)一步混粉操作，隨后經(jīng)分裝機(jī)完成干品的分裝、密封等過(guò)程，將產(chǎn)品嚴(yán)封于容器內(nèi)。
5.4 密閉與開(kāi)放系統(tǒng)
通常無(wú)菌工藝由一系列的無(wú)菌單元操作組成，單元操作分為“密閉”或“開(kāi)放”系統(tǒng)，采用“密閉”系統(tǒng)可更好的保障無(wú)菌水平。
5.4.1 “密閉”系統(tǒng)
“密閉”系統(tǒng)是通過(guò)物理隔離的方式，阻止環(huán)境中微生物進(jìn)入系統(tǒng)內(nèi)部，保護(hù)藥品免受外界的污染。因“密閉”系統(tǒng)設(shè)計(jì)上的優(yōu)越性，在無(wú)菌操作過(guò)程提供了可靠的無(wú)菌保護(hù)措施。企業(yè)進(jìn)行無(wú)菌原料藥工藝設(shè)計(jì)時(shí)，應(yīng)盡量考慮采用“密閉”系統(tǒng)的可行性。“密閉”系統(tǒng)至少具備以下特征：
5.4.1.1 能夠?qū)崿F(xiàn)在線滅菌（SIP）或系統(tǒng)在使用前進(jìn)行密閉和滅菌。
5.4.1.2 能夠在一個(gè)生產(chǎn)周期內(nèi)保持系統(tǒng)的完整性。且在與其他密閉系統(tǒng)連接時(shí)，能夠保持系統(tǒng)完整性不受破壞。
5.4.1.3 在實(shí)施預(yù)防性維護(hù)過(guò)程中，有相應(yīng)措施保護(hù)系統(tǒng)的完整性。
5.4.2 “開(kāi)放”系統(tǒng)
“開(kāi)放”系統(tǒng)是不符合“密閉”系統(tǒng)規(guī)定的一項(xiàng)或多項(xiàng)特征的系統(tǒng)，“開(kāi)放”系統(tǒng)條件下進(jìn)行的操作是影響最終藥品無(wú)菌特性的重要環(huán)節(jié)，如設(shè)備（或管道）的無(wú)菌連接、分裝過(guò)程容器的更換等，是引入微生物污染的高風(fēng)險(xiǎn)過(guò)程。模擬試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)重點(diǎn)考察以上過(guò)程中無(wú)菌保障措施的有效性。
6. 模擬試驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)及實(shí)施過(guò)程要求
模擬試驗(yàn)是一個(gè)系統(tǒng)性工程，通過(guò)模擬無(wú)菌生產(chǎn)工藝全過(guò)程，證實(shí)生產(chǎn)過(guò)程中無(wú)菌保障措施的有效性。因此，模擬試驗(yàn)實(shí)施應(yīng)關(guān)注以下幾方面：
6.1 開(kāi)展模擬試驗(yàn)的前提條件
開(kāi)展無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)之前，應(yīng)確認(rèn)與無(wú)菌工藝相關(guān)的支持性系統(tǒng)和滅菌系統(tǒng)等驗(yàn)證已完成，并達(dá)到了可接受的標(biāo)準(zhǔn)。
6.1.1 工藝設(shè)備、公用系統(tǒng)和輔助設(shè)施按照預(yù)期要求完成了設(shè)計(jì)、安裝、運(yùn)行確認(rèn)及與無(wú)菌生產(chǎn)有關(guān)的性能確認(rèn)。
6.1.2 已對(duì)工藝設(shè)備、公用系統(tǒng)、輔助設(shè)施等的滅菌方法完成了相應(yīng)的驗(yàn)證，物料及廠房、設(shè)施所用消毒劑及消毒方式完成了相關(guān)的驗(yàn)證。
6.1.3 藥液及與產(chǎn)品接觸的氣體、設(shè)備組件、容器具滅菌工藝完成了相應(yīng)的驗(yàn)證。
6.1.4 無(wú)菌生產(chǎn)區(qū)域的氣流及環(huán)境達(dá)到了設(shè)計(jì)要求，并能穩(wěn)定運(yùn)行。依據(jù)規(guī)定的消毒方法和頻次進(jìn)行環(huán)境消毒，應(yīng)避免消毒劑的過(guò)度使用。
6.1.5 根據(jù)無(wú)菌生產(chǎn)工藝要求建立了相關(guān)文件。
6.1.6 參與無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)的人員接受了藥品GMP、無(wú)菌更衣、無(wú)菌操作、微生物知識(shí)和模擬試驗(yàn)方案的培訓(xùn)。
6.1.7 進(jìn)入無(wú)菌潔凈區(qū)的全部人員通過(guò)了更衣程序的確認(rèn)，并采取文件或其他措施，確定了每位參與者可進(jìn)入的區(qū)域和允許的無(wú)菌操作項(xiàng)目。
6.2 基于無(wú)菌風(fēng)險(xiǎn)的模擬試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)
模擬試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)應(yīng)結(jié)合無(wú)菌生產(chǎn)工藝，盡量與實(shí)際無(wú)菌操作過(guò)程保持一致，以求試驗(yàn)結(jié)果真實(shí)反映生產(chǎn)過(guò)程的無(wú)菌保障水平。
6.2.1 無(wú)菌生產(chǎn)工藝的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估
無(wú)菌生產(chǎn)工藝的設(shè)計(jì)基于對(duì)產(chǎn)品特性、工藝技術(shù)和無(wú)菌保證措施的認(rèn)知和經(jīng)驗(yàn)的累積，設(shè)計(jì)模擬試驗(yàn)方案前應(yīng)對(duì)無(wú)菌生產(chǎn)工藝開(kāi)展系統(tǒng)性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，以充分識(shí)別無(wú)菌生產(chǎn)過(guò)程中潛在風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，方案設(shè)計(jì)時(shí)充分考慮風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的結(jié)果。
6.2.2 模擬試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)時(shí)，應(yīng)重點(diǎn)考察和評(píng)估高風(fēng)險(xiǎn)無(wú)菌操作過(guò)程，如溶媒結(jié)晶工藝中引入晶種的過(guò)程。無(wú)菌生產(chǎn)工藝的暴露操作是影響最終原料藥無(wú)菌特性的重要環(huán)節(jié)，如設(shè)備（或管道）的無(wú)菌連接、無(wú)菌容器的轉(zhuǎn)運(yùn)和更換、灌裝等關(guān)鍵操作。
6.2.3 證實(shí)人員的無(wú)菌操作能力能夠滿足無(wú)菌生產(chǎn)要求，是實(shí)施模擬試驗(yàn)的目的之一。模擬試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)時(shí)，應(yīng)結(jié)合工藝過(guò)程中的開(kāi)放系統(tǒng)，重點(diǎn)考察人員的無(wú)菌操作過(guò)程，評(píng)價(jià)人員無(wú)菌操作素養(yǎng)和防護(hù)措施的可靠性。
6.3 模擬介質(zhì)的選擇與評(píng)價(jià)
6.3.1 模擬介質(zhì)的選擇
應(yīng)考慮模擬介質(zhì)與無(wú)菌工藝的適宜性，結(jié)合被模擬產(chǎn)品的特點(diǎn)以及模擬介質(zhì)的可過(guò)濾性、澄清度、滅菌方式等方面選擇模擬介質(zhì)，以盡可能模擬無(wú)菌生產(chǎn)全過(guò)程。不應(yīng)選擇明顯具有抑菌性的模擬介質(zhì)，以確保模擬試驗(yàn)結(jié)果的可信度。通?？刹捎玫哪M介質(zhì)包括：促進(jìn)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基和安慰劑。
6.3.2 培養(yǎng)基的選擇
6.3.2.1 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）是一種廣譜性培養(yǎng)基，特別對(duì)無(wú)菌工藝環(huán)境中源自人體的細(xì)菌、芽孢和真菌有良好的促生長(zhǎng)效果，是無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)常用的培養(yǎng)基。
6.3.2.2 如果產(chǎn)品需充入惰性氣體、儲(chǔ)存在無(wú)氧條件，無(wú)菌操作在嚴(yán)格的厭氧環(huán)境中進(jìn)行時(shí)（即氧氣濃度低于0.1%），應(yīng)考慮采用厭氧培養(yǎng)基，如硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（FTM），也可選擇其他適宜的培養(yǎng)基。在厭氧的無(wú)菌工藝環(huán)境監(jiān)控中反復(fù)發(fā)現(xiàn)厭氧微生物或在產(chǎn)品無(wú)菌檢查中發(fā)現(xiàn)厭氧微生物時(shí)，應(yīng)考慮增加厭氧培養(yǎng)基開(kāi)展模擬試驗(yàn)。
6.3.2.3 用于模擬抑菌性產(chǎn)品的培養(yǎng)基，如有必要需評(píng)估抑菌性產(chǎn)品殘存對(duì)其促生長(zhǎng)能力及模擬試驗(yàn)結(jié)果的影響。
6.3.2.4 包含動(dòng)物來(lái)源成分的培養(yǎng)基，應(yīng)考慮培養(yǎng)基引入外源污染的風(fēng)險(xiǎn)。如BSE（可傳染性海綿腦病）、TSE（瘋牛?。┑蕊L(fēng)險(xiǎn)，亦可選用植物來(lái)源的培養(yǎng)基。
6.3.3 培養(yǎng)基的配制
6.3.3.1 模擬試驗(yàn)的培養(yǎng)基應(yīng)在適宜區(qū)域進(jìn)行準(zhǔn)備，需注意培養(yǎng)基粉塵在環(huán)境中的擴(kuò)散、殘留及去除，防止其殘存于環(huán)境及設(shè)備表面而造成微生物滋生。通常按照藥典要求或廠商提供的配制方法配制培養(yǎng)基。配制后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快滅菌或除菌過(guò)濾。
6.3.3.2 培養(yǎng)基在模擬試驗(yàn)前應(yīng)恢復(fù)至室溫，即用型無(wú)菌液體培養(yǎng)基儲(chǔ)存和使用條件應(yīng)遵循生產(chǎn)商要求。
6.3.4 培養(yǎng)基的除菌與滅菌
6.3.4.1 除菌過(guò)濾
由于培養(yǎng)基的特性與藥液有差異，培養(yǎng)基除菌過(guò)濾的濾器型號(hào)可與產(chǎn)品使用的過(guò)濾器不同。如因培養(yǎng)基顆?；蛏镓?fù)載較大等原因引起除菌過(guò)濾器堵塞時(shí)，可增加預(yù)過(guò)濾。應(yīng)考慮降低非無(wú)菌培養(yǎng)基中細(xì)菌和霉菌生長(zhǎng)的風(fēng)險(xiǎn)，以避免微生物生長(zhǎng)導(dǎo)致培養(yǎng)基過(guò)濾性能的降低。此外除菌過(guò)濾的方式無(wú)法避免支原體污染，濕熱滅菌或輻照滅菌有助于降低該潛在風(fēng)險(xiǎn)，必要時(shí)可配合除菌過(guò)濾聯(lián)合使用。針對(duì)以上情況應(yīng)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估并采取合理應(yīng)對(duì)措施。
6.3.4.2 濕熱滅菌
在濕熱滅菌過(guò)程中應(yīng)考慮避免受熱不均勻或滅菌不充分現(xiàn)象。應(yīng)對(duì)該滅菌方式進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和驗(yàn)證，也可使用無(wú)菌干粉或液體成品培養(yǎng)基。
滅菌過(guò)程應(yīng)遵循生產(chǎn)商推薦的滅菌時(shí)間和溫度的建議，并對(duì)滅菌過(guò)程予以驗(yàn)證。確保滅菌后培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)能力，避免過(guò)長(zhǎng)時(shí)間及過(guò)熱滅菌使培養(yǎng)基碳化造成其促生長(zhǎng)性能的降低，應(yīng)進(jìn)行促生長(zhǎng)能力試驗(yàn)。
6.3.4.3 輻照滅菌
使用輻照滅菌的培養(yǎng)基粉末，應(yīng)在適宜環(huán)境下進(jìn)行配制等操作。輻照滅菌過(guò)程應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，并在產(chǎn)品質(zhì)量報(bào)告中體現(xiàn)驗(yàn)證所用的菌種和劑量等信息。
6.3.5 培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力試驗(yàn)
6.3.5.1 應(yīng)在無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)前及14天培養(yǎng)后按照現(xiàn)行中國(guó)藥典方法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行促生長(zhǎng)能力試驗(yàn)。
6.3.5.2 按照中國(guó)藥典要求，培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力試驗(yàn)使用的菌種包括：白色念珠菌（CMCC98001）、黑曲霉（CMCC98003）、枯草芽孢桿菌（CMCC63501）、金黃色葡萄球菌（CMCC26003）、銅綠假單胞菌（CMCC10104）和生孢梭菌（CMCC64941）等。除標(biāo)準(zhǔn)菌株之外，還可考慮加入環(huán)境和無(wú)菌檢查中發(fā)現(xiàn)的典型微生物。促生長(zhǎng)試驗(yàn)接種量應(yīng)小于100CFU。按照中國(guó)藥典要求進(jìn)行培養(yǎng)，證明培養(yǎng)基能夠支持微生物的生長(zhǎng)。
6.3.6 其他模擬介質(zhì)的選擇及評(píng)價(jià)
6.3.6.1 其他模擬介質(zhì)的選擇
對(duì)于無(wú)菌粉末及特殊產(chǎn)品，可根據(jù)產(chǎn)品特性、無(wú)菌工藝、生產(chǎn)設(shè)備及模擬介質(zhì)特點(diǎn)，也可選用其他模擬介質(zhì)，如安慰劑。模擬介質(zhì)的流動(dòng)性應(yīng)盡可能類似于被模擬產(chǎn)品，易于灌裝/分裝等無(wú)菌操作。模擬介質(zhì)還應(yīng)具有易于滅菌，無(wú)抑菌性，易溶解等特性。常用模擬介質(zhì)有聚乙二醇、乳糖、甘露醇、氯化鈉、凡士林等。模擬介質(zhì)的滅菌過(guò)程應(yīng)經(jīng)驗(yàn)證并提供相關(guān)報(bào)告，其內(nèi)容包括滅菌方式對(duì)模擬介質(zhì)特性有無(wú)不良影響，滅菌后的無(wú)菌性。模擬介質(zhì)的包裝形式應(yīng)與被模擬產(chǎn)品的包裝形式保持一致。
6.3.6.2 其他模擬介質(zhì)的評(píng)價(jià)
在使用模擬介質(zhì)前應(yīng)對(duì)其適用性進(jìn)行確認(rèn)，包括抑菌試驗(yàn)、溶解度試驗(yàn)等，如選用無(wú)菌模擬介質(zhì)還應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)。抑菌試驗(yàn)通常使用枯草芽孢桿菌（CMCC63501）和白色念珠菌（CMCC98001）。除此之外，還應(yīng)考慮加入環(huán)境和無(wú)菌檢查中發(fā)現(xiàn)的典型微生物。無(wú)菌模擬介質(zhì)用無(wú)菌水分散后，加入到無(wú)菌培養(yǎng)基中，達(dá)到模擬工藝選用的濃度范圍，然后每份培養(yǎng)基中接種10—100CFU。陽(yáng)性對(duì)照接種到不含無(wú)菌模擬介質(zhì)的試管中，按照現(xiàn)行中國(guó)藥典要求培養(yǎng)7天，所有試管應(yīng)明顯微生物生長(zhǎng)。
6.4 模擬灌裝的數(shù)量和持續(xù)時(shí)間
6.4.1 無(wú)菌工藝模擬灌裝的數(shù)量應(yīng)足以保證評(píng)價(jià)的有效性及完成模擬方案中設(shè)計(jì)的各種干預(yù)活動(dòng)，通常模擬灌裝的數(shù)量不宜低于正常生產(chǎn)分裝數(shù)量。
6.4.2 應(yīng)對(duì)所設(shè)計(jì)的模擬方式、持續(xù)時(shí)間、灌裝的數(shù)量、預(yù)期收率作出合理說(shuō)明。
6.4.3 模擬試驗(yàn)所用模擬介質(zhì)的量，應(yīng)能夠覆蓋無(wú)菌工藝設(shè)備的全部?jī)?nèi)表面，特別是混粉過(guò)程，應(yīng)確保模擬介質(zhì)覆蓋混粉器內(nèi)壁全部表面。
6.4.4 考慮到模擬最差條件的需要，模擬關(guān)鍵無(wú)菌操作過(guò)程的維持時(shí)間不應(yīng)低于實(shí)際生產(chǎn)用時(shí)。
6.5 容器裝量
容器中培養(yǎng)基灌裝量應(yīng)考慮適宜微生物生長(zhǎng)的需要和容器內(nèi)表面覆蓋的要求，灌裝量不必與產(chǎn)品相同。適宜的裝量既可保證產(chǎn)品通過(guò)倒置和旋轉(zhuǎn)接觸到容器所有內(nèi)表面，又有足夠的氧氣支持微生物的生長(zhǎng)。
6.6 模擬試驗(yàn)方法的選擇
通常無(wú)菌原料藥生產(chǎn)工藝由多個(gè)工藝單元構(gòu)成。模擬試驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)應(yīng)考慮試驗(yàn)過(guò)程可連續(xù)性問(wèn)題，并確定采用連續(xù)工藝模擬還是分段模擬。
6.6.1 連續(xù)工藝模擬方式
6.6.1.1 這種模擬方式是將整個(gè)無(wú)菌過(guò)程視為一個(gè)整體，模擬介質(zhì)不間斷地完成各個(gè)單元操作，并在最終分裝容器內(nèi)進(jìn)行無(wú)菌培養(yǎng)和判定，以評(píng)價(jià)生產(chǎn)過(guò)程的無(wú)菌保障水平。
6.6.1.2 連續(xù)工藝模擬方式的選擇，取決于模擬介質(zhì)在模擬過(guò)程中的適用性，如噴霧干燥工藝可采用液體模擬介質(zhì)，通過(guò)模擬噴霧干燥過(guò)程，可將液體模擬介質(zhì)轉(zhuǎn)化為固體模擬介質(zhì)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)分裝、密封等過(guò)程的模擬。
6.6.1.3 連續(xù)工藝模擬可以真實(shí)反映整體無(wú)菌保障水平。但也有其不足之處，如發(fā)現(xiàn)污染，調(diào)查污染源的難度較大。
6.6.2 分段模擬方式
6.6.2.1 分段模擬方式是將無(wú)菌生產(chǎn)過(guò)程按照工藝單元分割成若干段，逐段進(jìn)行模擬試驗(yàn)，分段數(shù)量取決于工藝過(guò)程和模擬介質(zhì)。模擬試驗(yàn)最終的結(jié)果是各段獨(dú)立模擬試驗(yàn)結(jié)果的累積，對(duì)一些無(wú)菌工藝而言，如結(jié)晶工藝，可根據(jù)需要變換采用液體或固體模擬介質(zhì)，保持與實(shí)際工藝過(guò)程的一致性。
6.6.2.2 分段工藝模擬的優(yōu)點(diǎn)是可以特定評(píng)價(jià)某一單元操作的無(wú)菌風(fēng)險(xiǎn)，如發(fā)現(xiàn)微生物污染，相對(duì)于連續(xù)工藝模擬更易于發(fā)現(xiàn)污染源，進(jìn)而采取針對(duì)性糾正措施。
6.6.2.3 分段模擬方式也有不足之處，如：需要更多種類或數(shù)量的模擬介質(zhì)；模擬介質(zhì)需要多次無(wú)菌化處理，增加潛在污染風(fēng)險(xiǎn)；需要采集更多的物料、環(huán)境和人員監(jiān)測(cè)樣本進(jìn)行評(píng)價(jià)。
6.7 最差條件的選擇
最差條件并不是指人為創(chuàng)造的超出允許范圍的生產(chǎn)狀況和環(huán)境。為了確認(rèn)無(wú)菌工藝風(fēng)險(xiǎn)控制的有效性，應(yīng)通過(guò)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估并結(jié)合無(wú)菌生產(chǎn)工藝、設(shè)備裝備水平、人員數(shù)量和干預(yù)等因素來(lái)設(shè)計(jì)模擬試驗(yàn)的最差條件。包括但不限于以下方面：
6.7.1 人員
應(yīng)充分考慮人員及其活動(dòng)對(duì)無(wú)菌生產(chǎn)工藝帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)，如模擬生產(chǎn)過(guò)程的最多人數(shù)，當(dāng)操作人員數(shù)量減少可能導(dǎo)致其他方面污染風(fēng)險(xiǎn)增加時(shí)，則此類條件也視為最差條件之一。參與人員應(yīng)包括日常參與到無(wú)菌生產(chǎn)的全部人員，如生產(chǎn)操作、取樣、環(huán)境監(jiān)測(cè)和設(shè)備設(shè)施維護(hù)人員，同時(shí)應(yīng)考慮以上人員交叉作業(yè)、班次輪換、更衣、夜班疲勞狀態(tài)等因素。
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